流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞DNA含量,通過染色定量分析DNA,亦可通過熒光顯微鏡觀察形態(tài)變化。

      AO屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標(biāo)記 DNA、RNA，屬于異染性熒光染 料。該染料具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核 DNA 和 RNA 染色。因此 AO 常用于細(xì)胞內(nèi) DNA 和 RNA 進(jìn)行檢測(cè)。AO 與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO 嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間， 這種結(jié)合方式主要為 AO 與 DNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為 530nm，激發(fā)后呈綠色熒光；2、靜電吸 引，帶正電荷的 AO 與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合，這種結(jié)合方式主要為 AO 與 RNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為 640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結(jié)合會(huì)呈桔黃色或桔紅色熒 光。因此，AO嵌合到雙鏈 DNA 分子中顯綠色，與 DNA 單鏈或 RNA 結(jié)合時(shí)發(fā)桔黃色或橙紅色 熒光。
AO染色液(1mg/ml)為儲(chǔ)存液，使用時(shí)應(yīng)稀釋到合適濃度后使用。染色后在熒光顯微鏡下觀 察，AO可透過正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固 縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。AO使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片 顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。AO染色常與 EB 染色合用雙染，因 EB 只染死細(xì)胞使 之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。
 

自備材料：  

熒光顯微鏡，低速離心機(jī) ，PBS，細(xì)胞計(jì)數(shù)板 ，載玻片、蓋玻片 

操作步驟(僅供參考)：

      1、 收集細(xì)胞(采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，應(yīng)先固定細(xì)胞)，用 PBS 清洗細(xì)胞 1 次，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃 度至 106/ml。
      2、 取適量的細(xì)胞懸液，加入 AO Stain(1mg/ml)，使 AO 終濃度為 8.5～17μg/ml，輕輕混 勻。
      3、 室溫避光染色 15～20min，滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細(xì)胞儀分析。
      4、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng) 488nm，阻斷濾光片波長(zhǎng) 515nm)，計(jì)數(shù)并拍照。

注意事項(xiàng)：

      1、 AO Stain(1mg/ml)不含破膜劑，較少單獨(dú)使用。
      2、 AO染色常與 EB 染色合用，可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。
      3、 如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳。
      4、 操作過程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。
      5、 試劑有一定毒性，請(qǐng)小心操作。
      6、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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標(biāo)題:Sodium Sulfite-Triggered Hepatocyte Ferroptosis via mtROS/Lysosomal Membrane Permeabilization-Mediated Lysosome Iron Efflux

成員:Meitong Liu, Jing Lu, Yuelin Chen, Shengzhuo Zhang, Jiakang Guo, Shuang Guan

論文因子:6.1 發(fā)表期刊:JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY pmid:37871339

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標(biāo)題:Chronological adhesive cardiac patch for synchronous mechanophysiological monitoring and electrocoupling therapy

成員:Yu Chaojie, Shi Mingyue, He Shaoshuai, Yao Mengmeng, Sun Hong, Yue Zhiwei, Qiu Yuwei, Liu Baijun, Liang Lei, Zhao Zhongming, Yao Fanglian, Zhang Hong, Li Junjie

論文因子:16.6 發(fā)表期刊:Nature Communications pmid:37803005

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標(biāo)題:Layered Double Hydroxide-Loaded miR-30a for the Treatment of Breast Cancer In Vitro and In Vivo

成員:Shiwen Zhang, Siyan Pang, Wenhao Pei, Haitao Zhu, Yingxiang Shi, Ziyang Liu, Lingyu Mao, Xiuru Shi, Shuang Tao, Chenchen Geng, Sulian Chen, Linnan Yang, Changjie Chen, Qingling Yang, Wenrui Wang

論文因子:4.132 發(fā)表期刊:ACS Omega pmid:37273596

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標(biāo)題:Nucleophilic and redox properties of polybrominated diphenyl ether derived-quinone/hydroquinone metabolites are responsible for their neurotoxicity

成員:徐蕾

論文因子:10.588 34329100

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標(biāo)題:Supercritical carbon dioxide-assisted nanonization of dihydromyricetin for anticancer and bacterial biofilm inhibition efficacies

成員:徐沛瑤

論文因子:3.481

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

AO染色液(1mg/ml)

AO染色液(1mg/ml)