運(yùn)輸溫度：常溫運(yùn)輸

本品為高效組織細(xì)胞裂解液。主要用于從動(dòng)物組織和動(dòng)物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白。組織活細(xì)胞本產(chǎn)品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml），PMSF請(qǐng)于-20℃保存。

使用說明

如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀，請(qǐng)放室溫半小時(shí)或者常溫水浴使沉淀溶解。

根據(jù)使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM?；靹騻溆?（PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1、樣品前處理：

a)對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)對(duì)于組織樣品： 把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。

用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注意事項(xiàng) ：

本試劑為強(qiáng)烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同時(shí)，也會(huì)將基因組一并釋放出來，造成細(xì)胞裂解液粘稠，此時(shí)可以直接加入蛋白上樣緩沖液，煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測(cè)定濃度，可入加少量 SDS（1%），煮沸后離心測(cè)濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒，請(qǐng)選擇BCA法或者Lowry法檢測(cè)蛋白濃度。

如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

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標(biāo)題:Maresin1 regulates neutrophil recruitment and IL-10 expression in Aspergillus fumigatus keratitis

成員:Qing Tang Chengye Che Jing Lin Hong He Wenyi Z

論文因子:3.118 發(fā)表期刊:International Immunopharmacology (2019)69,103-109 pmid:30690344

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標(biāo)題:Nanosecond Pulsed Electric Fields (nsPEFs) Regulate Phenotypes of Chondrocytes through Wnt/β-catenin Signaling Pathway

成員:Kun Zhang, Jinsong Guo, Zigang Ge ,Jue Zhang

論文因子:4.259 發(fā)表期刊:Scientific Reports 4, Article number: 5836 (2014) pmid:25060711

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標(biāo)題:High expression of AKR1B10 predicts low risk of early tumor recurrence in patients with hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma

成員:Yan-Yan Wang, Lu-Nan Qi, Jian-Hong Zhong, Hong-Gui

論文因子:4.259 發(fā)表期刊:Scientific Reports 7, Article number: 42199 (2017) pmid:28181486

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標(biāo)題:Assessment of the role of intracranial hypertension and stress on hippocampal cell apoptosis and hypothalamic-pituitary dysfunction after TBI

成員:Huajun Tan, Weijian Yang, Chenggang Wu, Baolong Li

論文因子:4.259 發(fā)表期刊:Scientific Reports 7, Article number: 3805 (2017) pmid:28630478

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

高效RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)

高效RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)