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M1070 D2000 plus DNA Ladder

M1070 D2000 plus DNA Ladder是由單獨(dú)制備的PCR產(chǎn)物混合而成，共有9條DNA段，已加入上樣緩沖液，可以直接電泳，每次上樣5μl。為便于電泳后觀察，特異性加強(qiáng)750bp條帶，其濃度約為100ng/5μl，其它條帶的DNA濃度約為50ng/5μl。

參考片段(bp)：100、250、500、750、1000、1500、2000、3000、5000

質(zhì)粒是細(xì)胞內(nèi)的一種環(huán)狀的小分子DNA，是DNA重組的常用載體，在DNA重組中，質(zhì)?；蚪?jīng)過改造后的質(zhì)粒載體可通過連接外源基因構(gòu)成重組體。在質(zhì)粒提取過程中，多數(shù)質(zhì)粒粗提取物中含有三種構(gòu)型的質(zhì)粒：共價閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）、質(zhì)粒的兩條鏈沒有斷裂、超螺旋開環(huán)DNA（ocDNA）、質(zhì)粒的一條鏈斷裂、松弛的環(huán)狀分子線形DNA（lDNA）：質(zhì)粒的兩條鏈均斷裂；線性分子質(zhì)粒DNA的分子構(gòu)型。

質(zhì)粒小量提取的方法

1.將3~5ml菌液13,000rpm離心30秒收集沉淀（菌體）。 如果用1.5ml或2ml離心管則需反復(fù)離心2～3次。

2.倒掉上清，將沉淀（菌體）*懸浮于100μl懸 浮液（溶液I）中。上清要盡可能去除干凈，可用濾紙吸干。沉淀要 用混旋器*懸浮，否則將直接導(dǎo)致下一步的裂 解不*，進(jìn)而影響質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和純度。

3.加入150μl裂解液（溶液II），輕柔地顛倒混勻10 次左右，溶液逐漸變得粘稠、清亮。不可用混旋器劇烈振蕩，否則會使質(zhì)粒DNA斷裂； 裂解時間不宜超過5分鐘，否則會造成染色體DNA 的污染及質(zhì)粒DNA的產(chǎn)率降低。